禽病診斷史發(fā)展歷程和科學(xué)態(tài)度是造成鴿病及禽病誤診的最常見(jiàn)原因,而用藥錯(cuò)誤不僅僅影響到鴿子更會(huì)影響到人類健康。 看圖和剖檢診斷的歷史必然性和誤診必然性 看圖和剖檢診斷在今天仍然被很多專業(yè)獸醫(yī)師和大多養(yǎng)殖企業(yè)使用著,但看圖和剖檢診斷是最不準(zhǔn)的診斷方法。例如部分沙門氏菌會(huì)有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣現(xiàn)象,所以患病鴿的糞便為綠色帶氣泡水便并伴有酸味兒;但綠色發(fā)酸帶氣泡水便未必就是沙門氏菌病,原因很簡(jiǎn)單,產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細(xì)菌不止沙門氏菌。所以,根據(jù)糞便就判斷為沙門氏菌感染顯然不夠嚴(yán)謹(jǐn)?上У氖呛芏囵B(yǎng)殖企業(yè)的技術(shù)高手們依然信誓旦旦不容置疑的鼓吹他們的經(jīng)驗(yàn)和火眼金睛,這些人的學(xué)歷最低大專,本科也不在少數(shù),想想真是教育的悲哀。高等教育我認(rèn)為最核心的是讓學(xué)生明白“科學(xué)態(tài)度”,沒(méi)有科學(xué)態(tài)度作為前提學(xué)再多的知識(shí)最終還會(huì)誤事。 青霉素問(wèn)世標(biāo)志著人類正式邁入抗生素時(shí)代?股貢r(shí)代之初,血清學(xué)和分子生物學(xué)剛剛處于萌芽階段,所以看圖和剖檢診斷是那個(gè)時(shí)代的必然產(chǎn)物。再加上社會(huì)流動(dòng)性小,養(yǎng)殖量小等客觀原因?qū)е履莻(gè)時(shí)代致病微生物遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于當(dāng)代,這就決定了那個(gè)時(shí)代看圖和剖檢診斷準(zhǔn)度比較高。伴隨養(yǎng)殖量激增,社會(huì)流動(dòng)性增強(qiáng),致病微生物因?yàn)榛蜣D(zhuǎn)移和變異等等原因種類大增。2010年的沙門氏菌國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)附錄中的種類已近百種之多,這些都是致病性沙門氏菌,再加上非致病性沙門氏菌那我就不知道到底有多少種了,而且,毫無(wú)疑問(wèn),種類還會(huì)繼續(xù)增加。 遙記當(dāng)年見(jiàn)過(guò)一加拿大黑人獸醫(yī)師,此君兩個(gè)大拇指的指甲“尖、厚、硬、長(zhǎng)而鋒利”。他給雞剖檢從來(lái)不用剪子,用指甲直接劃開(kāi),根據(jù)癥狀即可判斷出是哪種病,之后下藥麻利,療效確實(shí)。伴隨時(shí)代發(fā)展,據(jù)說(shuō)他因?yàn)檎`診病例逐漸增多而逐漸淡出家禽養(yǎng)殖行業(yè)。 以沙門氏菌檢測(cè)的GB4789.4—2010標(biāo)準(zhǔn)操作流程為例簡(jiǎn)單介紹一下如何診斷 這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是食品領(lǐng)域的沙門氏菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),參考了一些禽病沙門氏菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),個(gè)人覺(jué)得還是這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)更全面和系統(tǒng)一些,因此以這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)為例來(lái)簡(jiǎn)單闡述一下如何以目前的科技水平準(zhǔn)確診斷沙門氏菌。 整個(gè)檢測(cè)流程可分為“前曾菌、曾菌、分離、生化試驗(yàn)、血清學(xué)鑒定、出報(bào)告”這六個(gè)漸次過(guò)程。我們以糞便為檢測(cè)物,簡(jiǎn)單闡述一下操作過(guò)程。 前曾菌:把糞便收集好,稱取25mg糞便樣品倒入盛有225ml的緩沖蛋白胨水(BPW)的無(wú)菌均質(zhì)杯中,之后以8000轉(zhuǎn)/分鐘-10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心2分鐘。無(wú)菌操作將清液樣品轉(zhuǎn)至 500 mL 錐形瓶中于 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 8 h~18h。 曾菌:輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物,移取 1 mL,轉(zhuǎn)種于 10 mL 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液內(nèi),于 42 ℃±1 ℃培養(yǎng) 18 h~24h。同時(shí),另取 1 mL,轉(zhuǎn)種于 10 mL亞硒酸鹽胱氨酸 (SC) 內(nèi),于 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 18 h~24 h。這兩種培養(yǎng)基的不同溫度原因在于沙門氏菌不僅僅只寄生于禽類,因?yàn)榍蓊惡筒溉閯?dòng)物體溫不同,所以分別進(jìn)行了兩種溫度的曾菌培養(yǎng)。 關(guān)于曾菌的說(shuō)明:糞便中實(shí)際上有很多種細(xì)菌和微生物,很多人覺(jué)得直接上顯微鏡就能看到致病菌,這是原則性錯(cuò)誤。沙門氏菌的個(gè)頭得用1600倍的油鏡看,這是光學(xué)顯微鏡的最高倍數(shù)了,這個(gè)倍數(shù)決定細(xì)菌必須制成標(biāo)本才能觀察。油鏡的使用特點(diǎn)決定不能直接觀察活體,因?yàn)橛顽R無(wú)法使用蓋玻片,而糞便中的微生物濃度太低不支持成功制作標(biāo)本,所以無(wú)論是為了革蘭氏染色還是為了進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)都得有曾菌這個(gè)過(guò)程。 分離:分別用接種環(huán)取增菌液 1 環(huán),劃線接種于一個(gè)亞硫酸鉍( BS) 瓊脂平板和一個(gè)木糖賴氨酸脫氧膽鹽( XLD) 瓊脂平板(或 HE 瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板)。于 36 ℃±1 ℃分別培養(yǎng) 18 h~24 h (XLD 瓊脂平板、HE 瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板) 或 40 h~48 h (BS 瓊脂平板),觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落,根據(jù)各種培養(yǎng)基菌落顏色和狀態(tài)“粗”判斷疑似沙門氏菌落。 關(guān)于分離的說(shuō)明:我們的細(xì)菌樣品來(lái)自糞便,而糞便中有很多種細(xì)菌,不同菌屬對(duì)培養(yǎng)基的要求以及代謝產(chǎn)物都不同,根據(jù)菌落顏色和狀態(tài)來(lái)初步判斷哪個(gè)或哪些菌落是疑似沙門氏菌,這個(gè)類似于PH試紙的顯色原理。 生化試驗(yàn):細(xì)菌種屬不同生化特征也不同,就像三價(jià)鐵離子可以用硫氰化鉀鑒定一樣的道理,我們根據(jù)各種細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同來(lái)進(jìn)行化學(xué)鑒定。這種鑒定通常只能判斷出是哪個(gè)“屬”的細(xì)菌,而不能具體到是這個(gè)屬中的哪種細(xì)菌。如果想進(jìn)一步鑒定還得進(jìn)行血清學(xué)鑒定,但到此為止已經(jīng)可判斷出是不是沙門氏菌了。 血清學(xué)試驗(yàn):血清學(xué)鑒定的依據(jù)是抗原抗體反應(yīng),也是最終確定究竟是哪種沙門氏菌的方法。這一步試驗(yàn)是成本最高的試驗(yàn),為什么高?因?yàn)樯抽T氏菌種類太多了。做完這步就可以出報(bào)告了。 細(xì)菌形態(tài)及沙門氏菌分類 細(xì)菌按形狀可分為桿菌和球菌,按有無(wú)鞭毛可分為有鞭毛(H)和無(wú)鞭毛(O),即使有鞭毛,那鞭毛的數(shù)量也有本質(zhì)區(qū)別。沙門氏菌按形態(tài)分為無(wú)毛(O)和有毛(H)兩種,但實(shí)際上沙門氏菌是一個(gè)很大的屬,下面把GB4789.4—2010標(biāo)準(zhǔn)的沙門氏菌種類列舉部分。 A 群 甲型副傷寒沙門氏菌 B 群 基桑加尼沙門氏菌、阿雷查瓦萊塔沙門氏菌、馬流產(chǎn)沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、利密特沙門氏菌、阿邦尼沙門氏菌、維也鈉沙門氏菌、伯里沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、圣保羅沙門氏菌、里定沙門氏菌、徹斯特沙門氏菌 、德?tīng)柋吧抽T氏菌、阿貢納沙門氏菌、埃森沙門氏菌、加利福尼亞沙門氏菌、金斯敦沙門氏菌、布達(dá)佩斯沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、拉古什沙門氏菌、布雷登尼沙門氏菌、基爾瓦沙門氏菌Ⅱ、海德?tīng)柋ど抽T氏菌、印地安納沙門氏菌、斯坦利維爾沙門氏菌、伊圖里沙門氏菌。 C1 群 奧斯陸沙門氏菌、愛(ài)丁保沙門氏菌、布隆方丹沙門氏菌Ⅱ、丙型副傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、豬傷寒沙門氏菌、羅米他沙門氏菌、布倫登盧普沙門氏菌、里森沙門氏菌、蒙得維的亞沙門氏菌、里吉爾沙門氏菌、奧雷寧堡沙門氏菌、奧里塔蔓林沙門氏菌、湯卜遜沙門氏菌、康科德沙門氏菌、伊魯木沙門氏菌、姆卡巴沙門氏菌、波恩沙門氏菌、波茨坦沙門氏菌、格但斯克沙門氏菌、嬰兒沙門氏菌、巴布亞沙門氏菌、巴累利沙門氏菌、哈特福德沙門氏菌、三河島沙門氏菌、姆班達(dá)卡沙門氏菌、田納西沙門氏菌、布倫登盧普沙門氏菌、耶路撒冷沙門氏菌。 C2 群 習(xí)志野沙門氏菌、名古屋沙門氏菌、加瓦尼沙門氏菌、慕尼黑沙門氏菌、蔓哈頓沙門氏菌、紐波特沙門氏菌、科特布斯沙門氏菌、茨昂威沙門氏菌、林登堡沙門氏菌、塔科拉迪沙門氏菌、波那雷恩沙門氏菌、利齊菲爾德沙門氏菌、病牛沙門氏菌、查理沙門氏菌。 C3 群 巴爾多沙門氏菌、依麥克沙門氏菌、肯塔基沙門氏菌。 D 群 仙臺(tái)沙門氏菌、傷寒沙門氏菌 、 塔西沙門氏菌 、以色列沙門氏菌 、腸炎沙門氏菌 、布利丹沙門氏菌 、沙門氏菌 Ⅱ 、都柏林沙門氏菌 、芙蓉沙門氏菌 、巴拿馬沙門氏菌 、戈丁根沙門氏菌 、爪哇安納沙門氏菌 、雞-雛沙門氏菌。 E1 群 奧凱?粕抽T氏菌、瓦伊勒沙門氏菌、明斯特沙門氏菌、鴨沙門氏菌、紐蘭沙門氏菌、火雞沙門氏菌、雷根特沙門氏菌、西翰普頓沙門氏菌、阿姆德?tīng)柲崴股抽T氏菌、新羅歇爾沙門氏菌、恩昌加沙門氏菌、新斯托夫沙門氏菌、倫敦沙門氏菌、吉韋沙門氏菌、魯齊齊沙門氏菌、烏干達(dá)沙門氏菌、烏蓋利沙門氏菌、韋太夫雷登沙門氏菌、克勒肯威爾沙門氏菌、列克星敦沙門氏菌。 E4 群 薩奧沙門氏菌、卡拉巴爾沙門氏菌、山夫登堡沙門氏菌、斯特拉特福沙門氏菌、塔克松尼沙門氏菌、索恩保沙門氏菌。 F 群 昌丹斯沙門氏菌、阿柏丁沙門氏菌、布里赫姆沙門氏菌、威尼斯沙門氏菌、阿巴特圖巴沙門氏菌、魯比斯勞沙門氏菌! 其 他 群 浦那沙門氏菌、里特沙門氏菌、密西西比沙門氏菌、古巴沙門氏菌、蘇拉特沙門氏菌、松茲瓦爾沙門氏菌、非丁伏斯沙門氏菌、威斯敦沙門氏菌、上海沙門氏菌、自貢沙門氏菌、巴圭達(dá)沙門氏菌、迪尤波爾沙門氏菌、盧肯瓦爾德沙門氏菌、拉馬特根沙門氏菌、阿德萊沙門氏菌、旺茲沃思沙門氏菌、雷俄格倫德沙門氏菌、萊瑟沙門氏菌、達(dá)萊姆沙門氏菌。 鴿子沙門氏菌的若干猜想及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 在臨床上通常不必進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)來(lái)具體確定究竟是哪種沙門氏菌,只需把試驗(yàn)做到生化這一步就可以了。但,我一直擔(dān)心鴿子的沙門氏菌不屬于上面任何一種沙門氏菌,而是獨(dú)立的家鴿沙門氏菌,并且家鴿沙門氏菌可能也不僅僅只是一種,完全有可能這種是詹森沙門氏菌,那種是XXX公棚沙門氏菌,亦或沈陽(yáng)賽鴿沙門氏菌等等。倘真如我猜想,雖于臨床治療并無(wú)實(shí)質(zhì)影響,但對(duì)于預(yù)防的工作量那就大了。我們要詳細(xì)研究賽鴿沙門氏菌的傳播、易感、攜帶、發(fā)病條件等等問(wèn)題。 詹森曾經(jīng)說(shuō)過(guò)“短途鴿子應(yīng)該具備中短途快速還巢,中長(zhǎng)途穩(wěn)定還巢能力”,但很多鴿子第一趟300還可以,第二趟300就丟了。這種現(xiàn)象我一直覺(jué)得可能和體內(nèi)致病菌及病毒的增殖、發(fā)病有關(guān)。還是以沙門氏菌為例,任何一只鴿子都能檢測(cè)出來(lái)沙門氏菌,只不過(guò)沙門氏菌的量多寡而已。賽鴿糞便看起來(lái)很好,但這并不代表沙門氏菌含量是安全的,可能在鴿子飛到200公里的時(shí)候,沙門氏菌就要發(fā)作了,所以表現(xiàn)為失格甚至丟鴿。于是我產(chǎn)生了一個(gè)假設(shè)“鴿子體內(nèi)的致病菌是否會(huì)隨著飛行距離變化而呈現(xiàn)快速增殖和致病現(xiàn)象”,這個(gè)假設(shè)已經(jīng)得到類似實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。接下來(lái)我的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為“把熒光質(zhì)粒植入我家鴿子腸道內(nèi)的沙門氏菌體內(nèi),進(jìn)而對(duì)沙門氏菌在不同飛行距離的增殖和致病進(jìn)行便捷的量化跟蹤,目的是得到賽鴿上籠前的沙門氏菌安全指標(biāo),超標(biāo)就不上籠,”。 很多人家里都來(lái)過(guò)天落鳥,天落鳥大多進(jìn)棚就能發(fā)現(xiàn)有病。看上去沒(méi)病的天落鳥,只要放到朝北的陽(yáng)臺(tái),也就是說(shuō)沒(méi)有陽(yáng)光直射的地方正常飼養(yǎng)不超過(guò)三天大多也會(huì)發(fā)病。這種方法是誘導(dǎo)發(fā)病的一種方法,大家如果有興趣可以把剛從公棚買回來(lái)的遲歸鴿或者成績(jī)靠后的鴿子用此方法試一下,大多也發(fā)病。剖檢為腺胃乳頭有出血點(diǎn),脾腫大,腎腫大,肝臟腫大邊緣充血,肺部充血,氣囊有炎癥、哈德氏腺腫脹,大腦皮層充血和有出血點(diǎn)等等。這也說(shuō)明這些遲歸鴿或者成績(jī)靠后鴿子亦或天落鳥當(dāng)初根本就不具備上籠的健康條件,賽鴿界確實(shí)需要一套行之有效的量化的賽鴿上籠健康指標(biāo)。
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